Zielgruppe

Das Seminar richtet sich an HPLC-Anwender, welche die LC-MS-Detektion in ihrem Labor nutzen oder in diese leistungsstarke Technik einarbeiten möchten. Sie lernen die Grundlagen und Besonderheiten der Kopplungstechniker und erfahren, wie quantitative Ergebnisse zuverlässig ermittelt werden.

Lernziele & Nutzen

Die LC-MS-Technik ist eine der wichtigsten Kopplungs-techniken in der analytischen Chemie. Besonders häufig werden die Trennmethoden wie RP-LC (Reversed-Phase) und HILIC (Hyhlic Interaction Liquid Chromatography) mit der Massenspektrometrie kombiniert. Doch welche Methode eignet sich für welche Probe? Hier eine Eingruppierung:

• HILIC-MS: ideal für polare Moleküle wie Metabolite
• RP-LS-MS: besonders für Peptide und Polyphenole in pflanzlichen Extrakten

Neben den bewähren Kombinationen bietet auch die MS-MS-Kopplung entscheidende Vorteile, insbesondere bei der Strukturaufklärung und Quantifizierung von Molekülen.

In diesem Seminar erfahren die Teilnehmer die Vor- und Nachteile einzelner Ionisierungsmodi und erhalten Tipps für die Wahl von mobiler Phase und Puffersystemen. Das Ziel dieses Seminars ist es, Grundkenntnisse in der LC-MS zu vermitteln und durch praxisnahe Tipps den Einstieg in diese Technik zu erleichtern.

Einführung in die LC-MS-Kopplungstechnik

• Grundlagen der Massenspektrometrie
  • Isotopenmuster, Auflösung, Massengenauigkeit
  • Ionisierung: ESI, APCI
  • Unterschiedliche Gerätetypen und deren Einsatzmöglichkeiten
  • Framentierung (MS/MS)
• Grundlagen der HPLC-MS-Kopplung
  • stationäre Phasen (u.a. RP und HILIC)
  • mobile Phasen (Lösungsmittel, Additive)
  • Weitere Einflussfaktoren

LC-MS in der Praxis

• Einführung in die Methodenentwicklung
  • Optimierung von LC- und MS-Parametern (Auswahl von Säule, Lösungsmitteln und Additiven)
  • Probenaufarbeitung (SEP, PP, LLE u.a.)
  • Kalibrierung und Wartung
  • LC-MS-Fehlersuche
• Auswertung und Applikationsbeispiele
  • Mehrfachladungen, Adduktbildung
  • Isotopenmuster
  • Exakte Masse
  • Positiver/Negativer Messmodus
  • Methoden der Quantifizierung
  • Messmodi (SIM, MRM, PRM, u.a.)
  • Anwendungsbeispiele

Zielgruppe

Wissenschaftler/-innen und Labormitarbeiter/-innen, die mit der LC-MS (teilweise auch GC-MS) arbeiten und die ihre Kenntnisse in der Interpretation von Massenspektren weiter ausbauen wollen. Angesprochen sind vor allen Dingen Labormitarbeiter/-innen, welche die Daten der LC-MS auswerten und bewerten.

Lernziele & Nutzen

Die Massenspektrometrie ist ein nicht mehr wegzudenkendes Instrument zur Aufklärung unbekannter Strukturen und zur  Analyse komplexer Gemische sowohl in der chemischen als auch der biochemischen Analytik.

Die Interpretation der gewonnenen Daten ist eine echte Herausforderung. Die Ergebnisse der vorhandenen software-gestützten Auswertungen sind nur dann verlässlich interpretierbar, wenn vertiefte Kenntnisse zu den Grundlagen der Messungen selber als auch der Auswertung von Massenspektren vorhanden sind. Somit lassen sich Fehler schnell aufspüren und Ergebnisse richtig interpretieren.

In diesem Seminar werden Strategien und Vorgehensweisen zur Interpretation von MS-Spektren erarbeitet. Durch praktische Übungen werden die Möglichkeiten der Auswertung vermittelt, in gängige Software eingeführt und deren Vor- und Nacheile erläutert.  Ziel des Seminars ist es, zukünftig Spektren selbstständig interpretieren zu können.

Einführung und Wiederholung von MS-Grundlagen

• Ionisierungsverfahren
• Typen und Eigenschaften von Massenanalysatoren
• Fragmentierung und Fragmentierungsmethoden
• Aufbau und Terminologie von MS-Spektren

Grundlagen der Interpretation von MS-Spektren

• Bewertung verschiedener Spektren und Peaks (Addukte, Mehrfachladungen)
• Exakte Masse und Elementarzusammensetzung
• Besonderheiten durch das Ionisierungsverfahren

Auswertung und Interpretation von Spektren

• Manuelle Auswertung von MS-Spektren von kleinen Molekülen (Stickstoffregel, Fragmentierung)
• Manuelle Auswertung von MS-Spektren von Peptiden
• Software-unterstützte Auswertung von MS-Spektren von kleinen Molekülen
• Software-unterstützte Auswertung von MS-Spektren von Peptiden
• Abgleich mit Spektrenbibliotheken