Das Seminar richtet sich an Wissenschaftler und Labormitarbeiter, die bereits mit der HPLC arbeiten und ihre Kenntnisse in der Methodenentwicklung und -optimierung vertiefen möchten sowie Probleme in der HPLC vermeiden und/ oder beseitigen möchten.

Ein Schwerpunkt des Seminars ist die Entwicklung von neuen HPLC-Methoden, hierfür werden zunächst die verschiedenen Techniken (RP, HILIC, NP) vorgestellt und diskutiert. Abhängig von den Zielen der Optimierung von bestehenden HPLC-Methoden werden hierfür verschiedene Strategien vorgestellt. Weitere Themen, die in diesem Seminarteil angesprochen werden, sind insbesondere die Verkürzung von Analysezeiten und die Optimierung von Gradientenmethoden.

Im zweiten Schwerpunkt geht es um Tipps und Strategien zur Fehlersuche und -vermeidung. Hier werden die am häufigsten auftretenden Probleme angesprochen, deren Ursachen, die sowohl in der Methode als auch im HPLC-Gerät liegen können, aufgezeigt und Lösungen vorgestellt. Dabei werden typische Fehlerbilder in der HPLC präsentiert und Korrekturmöglichkeiten erläutert.

Dieser Themenblock wird mit vorbeugenden Maßnahmen zur Vermeidung von Problemen abgerundet. 

HPLC-Troubleshooting

• Erkennen von Fehlern im Chromatogramm
• Systematisches Vorgehen bei der Fehlerbeseitigung
• Lösungen für oft auftretende chromatographische Probleme
• Vorbeugen ist besser als korrigieren: Strategien zur Fehlerprävention
• Was beeinflusst die Robustheit einer Methode?

HPLC-Methodenentwicklung- und optimierung

• Grundlagen zu den verschiedenen Techniken (RP, NP, HILIC)
• Systematisches und effektives Vorgehen in der HPLC-Methodenentwicklung
• Einfluss verschiedener Parameter (stationäre Phase, mobile Phase, Säulendimensionen, Temperatur) bei der Methodenentwicklung
• Schnelle HPLC: Verschiedene Optionen zur Verkürzung von HPLC-Methoden unter Beibehaltung der Trennleistung
• Optimierung von isokratischen und Gradientenmethoden
• Optimierungsmöglichkeiten bei Pharmakopöe-Methoden

Das Tagesseminar richtet sich an HPLC-Anwender, welche die LC-MS-Detektion in ihrem Labor einsetzen oder in diese Technik einsteigen möchten. Grundlagen und Besonderheiten dieser Technik werden ebenso behandelt wie die Ermittlung quantitativer Ergebnisse.
Grundkenntnisse in der HPLC werden vorausgesetzt. Wir empfehlen den vorherigen Besuch der Seminare: "Grundlagen der HPLC" und/ oder "HPLC Troubleshooting und Methodenentwicklung".

Die LC-MS-Technik ist eine weitverbreitete und gängige Kopplungstechnik. Besonders beliebt ist die Kopplung von Trennmethoden wie RP-LC und HILIC mit der Massenspektrometrie. Welche der beiden Kopplungen wirklich Sinn macht, hängt von der zu untersuchenden Probe ab. So ist z.B. für die Untersuchung polarer Moleküle wie Metabolite, die HILIC-MS-Kopplung und für die Analyse von PAKs oder Polyphenole in pflanzlichen Extrakten die RP-LC-MS Kopplung prädestiniert.

Neben diesen Kombinationsmöglichkeiten sind auch MS-MS-Kopplungen denkbar, die eine große Rolle bei der Strukturaufklärung von Molekülen spielen.

In diesem Seminar erfahren die Teilnehmer die Vor- und Nachteile einzelner Ionisierungsmodi und erhalten Tipps für die Wahl von mobiler Phase und Puffersystemen. Das Ziel dieses Seminars ist es, Grundkenntnisse in der LC-MS zu vermitteln und über praktische Tipps den Einstieg in diese Technik zu erleichtern.

Einführung in die LC-MS-Kopplungstechnik

• Grundlagen der Massenspektrometrie, (Isotopenmuster, Auflösung, Massengenauigkeit, Empfindlichkeit)
• Grundlagen der HPLC (RP-LC und HILIC)
• Kopplungstechniken und Ionisierung: ESI, APCI, APPI
• Erläuterung unterschiedlicher Gerätetypen und deren Einsatzmöglichkeiten

LC-MS in der Praxis

• Einführung in die Methodenentwicklung
• Auswahl von Lösungsmitteln und Additiven (Säuren, Basen, Salze)
• Sensitivitätstest, Kalibration
• Performance-Test, (Re-)Kalibrierung und Wartung
• Messung und Berechnung von Auflösung, Massengenauigkeit, S/N und Empfindlichkeit
• LC-MS-Fehlersuche

Applikationsbeispiele und Auswertung

• Vergleich von ESI und APCI
• Auswertung von Spektren und Isotopenmustern Stickstoffregel
• Molekülionen, Adduktbildung, Mehrfachladungen
• Fragmentierung, MS/MS, MSn
• MS/MS Messmodi
• Erstellen und Verwenden von Spektrenbibliotheken
• Matrixeffekte
• Erläuterung der Messmodi (EIC, SIM, MRM)
• Quantifizierung
• Multikomponentenanalytik, sMRM