Das Seminar richtet sich an WissenschaftlerInnen und LabormitarbeiterInnen, die in die Technik der HPLC einsteigen oder ihr Wissen auffrischen möchten. Angesprochen sind vor allen Dingen LabormitarbeiterInnen, welche die Daten der HPLC-Analyse auswerten und bewerten. Es sind keine HPLC Vorkenntnisse nötig. 

Mit diesem Seminar erhalten die Teilnehmenden einen kompletten Überblick über die HPLC. Neben dem apparativen Aufbau einer HPLC-Anlage werden verschiedene Geräte- und Detektionstechniken vorgestellt. Auch der Einsatz verschiedener stationärer Phasen (Säulen) und deren Retentionsmechanismen (RP, NP) werden erläutert.

Ein Schwerpunkt des Seminars liegt in der Vermittlung von Fachwissen für MitarbeiterInnen in analytischen Laboratorien. Die Auswertung von Chromatogrammen hinsichtlich der Gehalts- und Identitätsbestimmung spielen dabei eine große Rolle.

Das Seminar wird abgerundet mit wertvollen Tipps zur Inbetriebnahme einer HPLC-Anlage und praxisnahen Strategien zur Auswertung von Chromatogrammen.

(geringfügige Änderungen vorbehalten)

Grundlagen der HPLC

• Grundbegriffe in der HPLC-Messung
• Apparativer Aufbau einer HPLC-Anlage                                                                                                                                                                                                                    
• Stationäre Phasen
• Umgang mit Säulen
• Gradientenmessung und isokratische Messung
• Laufmittel und Probenvorbereitung

Das Chromatogramm und seine Aussage

• Peaksymmetrie und Tailing
• Retentionszeit, Retentionsfaktor, Symmetriefaktor und Auflösung
• Peaks analysieren und integrieren
• Bodenzahl und Bodenhöhe

Gehaltsbestimmungen mit der HPLC (Quantifizierung)

• Die Kalibrierung
• Quantifizierung mittels externem Standard
• Quantifizierung mittels internem Standard

Etablierung eines HPLC-Assays

• Inbetriebnahme einer HPLC-Anlage
• Aufbau von Sequenzen
• Etablierung und Validierung der Methode                                                                                                                                                                                                                           
• Tägliche Routine und Systemeignungstests
• Bewertung der Systemstabilität

Das Seminar richtet sich an Mitarbeiter (Neueinsteiger sowie Anwender) der Bereiche Labor, Analytik und Forschung in der pharmazeutischen, chemischen, Biotech-, Nahrungsmittel- und Kosmetikindustrie sowie in Auftrags- und Forschungsinstituten.

Der Schwerpunkt des Seminars liegt auf der Vermittlung des Basiswissens der Massenspektrometrie. Neben den apparativen Einheiten eines Massenspektrometers werden die Vor- und Nachteile der verschiedenen Ionisierungstechniken erläutert und Tipps zur Probenvorbereitung gegeben.

Ein wichtiger Anwendungspunkt der massenspektrometrischen Analyse ist die Strukturaufklärung von Proteinen und Peptiden mittels Tandem-MS-Messungen. In diesem Seminar wird darauf eingegangen, wie diese Messungen durchgeführt werden und welche Möglichkeiten es gibt, die erzeugten Daten richtig auszuwerten und zu interpretieren. Auch die Quantifizierung mittels MS spielt in der heutigen Zeit eine bedeutende Rolle, die ebenso in diesem Seminar erläutert wird. Dabei wird die Quantifizierung mit externen und internen Standards sowie die  Quantifizierung mittels Isotopenmarkierungsexperimenten erläutert.

Die Bearbeitung von Beispielspektren hilft bei der Interpretation von Ergebnissen und dient dazu, das Gelernte zu veranschaulichen.

(geringfügige Änderungen vorbehalten)

Grundlagen der Massenspektrometrie

• Terminologie
• Isotopenmuster
• Parameter eines Massenspektrometers (Auflösung, Empfindlichkeit, Massengenauigkeit)

Apparativer Aufbau eines Massenspektrometers

• Erläuterung der gängigsten Ionisationsmethoden (ESI, APCI und MALDI)
• Aufbau und Funktionsweise verschiedener Massenanalysatoren (z.B. Ionenfallen-, Triple-Quadrupole- und Flugzeitmassenspektrometer)
• Funktionsweise von Detektoren
• Vergleich verschiedener Massenanalysatoren für unterschiedliche Fragestellungen

Tandem-Massenspektrometrie

• Aufbau und Verwendung verschiedener Tandem-Massenspektrometer
• Fragmentierungen und Strukturaufklärung

Spektrenauswertung und Interpretation

• Überblick über die verschiedenen Scantechniken
• Berechnung des Molekulargewichts
• Typische Störsignale
• Auswertung von Beispielspektren

Quantitative massenspektrometrische Analyse

• Quantifizieren mit externen und internen Standards
• Isotopenmarkierungsexperimente