Das Seminar richtet sich an WissenschaftlerInnen und LabormitarbeiterInnen, die in die Technik der HPLC einsteigen oder ihr Wissen auffrischen möchten. Angesprochen sind vor allen Dingen LabormitarbeiterInnen, welche die Daten der HPLC-Analyse auswerten und bewerten. Es sind keine HPLC Vorkenntnisse nötig. 

Mit diesem Seminar erhalten die Teilnehmenden einen kompletten Überblick über die HPLC. Neben dem apparativen Aufbau einer HPLC-Anlage werden verschiedene Geräte- und Detektionstechniken vorgestellt. Auch der Einsatz verschiedener stationärer Phasen (Säulen) und deren Retentionsmechanismen (RP, NP) werden erläutert.

Ein Schwerpunkt des Seminars liegt in der Vermittlung von Fachwissen für MitarbeiterInnen in analytischen Laboratorien. Die Auswertung von Chromatogrammen hinsichtlich der Gehalts- und Identitätsbestimmung spielen dabei eine große Rolle.

Das Seminar wird abgerundet mit wertvollen Tipps zur Inbetriebnahme einer HPLC-Anlage und praxisnahen Strategien zur Auswertung von Chromatogrammen.

(geringfügige Änderungen vorbehalten)

Grundlagen der HPLC

• Grundbegriffe in der HPLC-Messung
• Apparativer Aufbau einer HPLC-Anlage                                                                                                                                                                                                                     
• Stationäre Phasen
• Umgang mit Säulen
• Gradientenmessung und isokratische Messung
• Laufmittel und Probenvorbereitung

Das Chromatogramm und seine Aussage

• Peaksymmetrie und Tailing
• Retentionszeit, Retentionsfaktor, Symmetriefaktor und Auflösung
• Peaks analysieren und integrieren
• Bodenzahl und Bodenhöhe

Gehaltsbestimmungen mit der HPLC (Quantifizierung)

• Die Kalibrierung
• Quantifizierung mittels externem Standard
• Quantifizierung mittels internem Standard

Etablierung eines HPLC-Assays

• Inbetriebnahme einer HPLC-Anlage
• Aufbau von Sequenzen
• Etablierung und Validierung der Methode                                                                                                                                                                                                                           
• Tägliche Routine und Systemeignungstests
• Bewertung der Systemstabilität

Das Seminar richtet sich an Wissenschaftler und Labormitarbeiter, die bereits mit der HPLC arbeiten und ihre Kenntnisse in der Methodenentwicklung und -optimierung vertiefen möchten sowie Probleme in der HPLC vermeiden und/ oder beseitigen möchten.

Ein Schwerpunkt des Seminars ist die Entwicklung von neuen HPLC-Methoden, hierfür werden zunächst die verschiedenen HPLC-Modi (RP, HILIC, NP) vorgestellt und diskutiert. 
Abhängig von den Zielen der Optimierung von bestehenden HPLC-Methoden werden hierfür verschiedene Strategien vorgestellt. Weitere Themen, die in diesem Seminarteil angesprochen werden, sind insbesondere die Verkürzung von Analysezeiten und die Optimierung von Gradientenmethoden. 

Im zweiten Schwerpunkt geht es um Tipps und Strategien zur Fehlersuche und -vermeidung. Hier werden die am häufigsten auftretenden Probleme angesprochen, deren Ursachen - die sowohl in der Methode als auch im HPLC-Gerät liegen können - aufgezeigt und Lösungen vorgestellt. Dabei werden typische Fehlerbilder in der HPLC präsentiert und Korrekturmöglichkeiten erläutert. Dieser Themenblock wird mit vorbeugenden Maßnahmen zur Vermeidung von Problemen abgerundet. 

(geringfügige Änderungen vorbehalten)

HPLC-Methodenentwicklung und -optimierung 

• Grundlagen zu den verschiedenen Techniken (RP, NP, HILIC) 
• Systematisches und effektives Vorgehen in der HPLC-Methodenentwicklung
• Einfluss verschiedener Parameter (stationäre Phase, mobile Phase, Säulendimensionen, Temperatur) bei der Methodenentwicklung 
• Schnelle HPLC: Verschiedene Optionen zur Verkürzung von HPLC-Methoden unter Beibehaltung der Trennleistung 
• Optimierung von isokratischen und Gradientenmethoden 
• Optimierungsmöglichkeiten bei Pharmakopöe-Methoden 

HPLC-Troubleshooting 

• Erkennen von Fehlern im Chromatogramm 
• Systematisches Vorgehen bei der Fehlerbeseitigung 
• Lösungen für oft auftretende chromatographische Probleme 
• Vorbeugen ist besser als korrigieren: Strategien zur Fehlerprävention 
• Was beeinflusst die Robustheit einer Methode?